ПЦР: метод, который слишком хорош

Содержание

Полимеразная цепная реакция – информация для пациентов

ПЦР: метод, который слишком хорош

четверг, июля 18, 2013 – 08:33

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – сложный лабораторный метод, широко применяемый в медицине и других отраслях науки. В своё время ПЦР диагностика стала большим прорывом в науке. Можно сказать, что это – одно из важнейших открытий 20 века в медицине. За открытие метода Кери Муллис, учёный-биохимик, получил в 1993 году Нобелевскую премию.

С давних пор инфекции собирали с человечества горькую дань. Одна только чума унесла сотни тысяч жизней в средние века. В успешной борьбе с эпидемиями важным моментом является точная и своевременная диагностика.

ПЦР исследования как правило проводятся в лаборатории при клинике. Несмотря на то, что ПЦР тест на инфекцию достаточно дорог, цена компенсируется высокой точностью. Для установления точного диагноза достаточно сделать анализ один раз. При использовании других методов могут потребоваться дополнительные или повторные анализы.

Как проводится анализ на инфекционные заболевания

Наиболее часто для диагностики инфекций используются серологические и культуральные методы. В первом случае определяются антитела к возбудителю инфекции в сыворотке крови.

Во втором случае биологический материал, полученный от больного человека, используют для засевания особой среды, благоприятной для роста колоний возбудителя.

И в том, и в другом случае диагностика может занимать дни или даже недели.

ПЦР обследование может проводиться с любыми биологическими материалами, полученными от больного человека. В качестве образцов могут служить кровь и другие биологические, физиологические и патологические жидкости и среды. Можно провести ПЦР мочи или кала.

Чаще всего методом ПЦР определяют вирусные и атипичные инфекции, так как они могут не поддаваться обычной диагностике из-за особенностей вызываемого ими патологического процесса. Для того, чтобы диагностировать эти инфекции, необходимо время, в течение которого организм начнёт вырабатывать антитела, которые и определяются серологическими методами. Однако в ряде случаев это неприемлемо.

С помощью ПЦР вирус иммунодефицита человека может быть определён уже через дни или недели, максимально точно, без характерного для других методов периода серонегативного окна.

(Серонегативное окно – промежуток от момента заражения, в который организм ещё не начал вырабатывать достаточное для определения количество антител).

ПЦР диагностика туберкулёза также имеет больше преимуществ, по сравнению с анализами мокроты или флюрографией. Не нужно подвергать облучению организм, нет необходимости собирать мокроту.

Метод проведения ПЦР – ин витро означает лабораторное определение инфекции в изолированных от больного образцах.

Для проведения полимеразной цепной реакции необходим набор специальных реактивов.

В пробирки с реактивами вносят исследуемый материал. Пробирки помещают в специальный прибор – ПЦР амплификатор. Он служит для амплификации (увеличения числа) искомых фрагментов ДНК или РНК.

ПЦР амплификатор запускается в циклическом режиме. Каждый цикл, если в образцах присутствует последовательность ДНК или РНК возбудителя, в растворе накапливаются копии фрагментов этих нуклеиновых кислот.

Можно определить как присутствие возбудителя, так и его количество в образцах.

Типы ПЦР

Анализ методом ПЦР – качественный даёт следующий результат:

  • ПЦР – отрицательно, искомый возбудитель в образцах не обнаружен;
  • ПЦР – положительно, в образцах обнаружены последовательности, характерные для того или иного возбудителя.

Когда результат ПЦР положительный, это с 95% точностью свидетельствует о наличии диагностируемой инфекции. Точность ПЦР наборов, используемых для диагностики, достигает 100%.

5% ошибочных результатов обычно зависят от человеческого фактора. Так, нарушения правил хранения реактивов и техники проведения исследования могут значительно снизить точность анализов.

Количественный ПЦР анализ определяет такое понятие, как вирусная нагрузка. При этом можно определить, сколько в образцах, полученных от больного, содержалось комплектов ДНК возбудителя. Чем больше – тем тяжелее протекает инфекция. Также можно определить по снижению вирусной нагрузки успешность лечения.

Сдача биоматериала на ПЦР

Сдача ПЦР анализов проводится в клинике, обычно с утра. Во время визита к врачу вам сообщат, что нужно сдавать: кровь, мочу, мазок или соскоб. ПЦР способна определять возбудителей независимо от степени загрязнения материала.

В теории для положительного анализа достаточно присутствие в образцах всего одного возбудителя. На практике стараются создать более благоприятные условия. Для этого существуют некоторые правила:

  • если сдаёте мазок или соскоб из половых органов, следует воздержаться от половых актов за 3 дня до сдачи анализа;
  • не следует накануне сдачи анализов подмываться или спринцеваться с антибактериальными средствами;
  • за 3 часа до взятия мазка из уретры следует потерпеть и не мочиться.

В случае, когда пациент сдаёт кровь, можно не придерживаться этих правил.

Результаты исследования

Результаты ПЦР обычно готовы уже через сутки после сдачи анализов. Качественный анализ выглядит просто. ПЦР расшифровка не требуется, так как обычно в первой графе указывается возбудитель, во второй – результат. Например, так:

ВозбудительРезультат
(ПЦР) Уреаплазма уреалитикумотр.
(ПЦР) Хламидиозотр.
(ПЦР) ЦМВпол.
(ПЦР) Герпес простойпол.

В скобках указывается метод – ПЦР. Сделать интерпретацию не сложно. У пациента из примера обнаружен качественным методом ПЦР цитомегаловирус (ЦМВ) и герпес. Уреаплазма и хламидия: возбудители инфекции не обнаружены.

Количественный анализ даёт числовой результат, обычно в МЕ/мл. Это означает что в 1 мл исследуемого образца обнаружено определённое количество копий ДНК или РНК возбудителя, в международных единицах. В зависимости от величины определяется тяжесть инфекции. Обычно для определения вирусной нагрузки исследуют кровь, так как при заболевании вирусы свободно циркулируют в крови.

Где можно сделать ПЦР

Важно сдавать анализы в клинике, хорошо себя зарекомендовавшей. Несмотря на то, что метод очень точен, на его результаты влияет соблюдение протокола исследования.

Не стоит искать клинику, руководствуясь результатами запросов в поисковой системе, типа: ПЦР Москва, где делать или ПЦР Ставрополь клиника.

Как правило, в каком месте лучше делать анализ методом ПЦР, рекомендует ваш лечащий врач.

Если результат ПЦР положительный, необходимо сделать повторное исследование в другой лаборатории. Это исключит ошибку, зависящую от человеческого фактора.

Embedded video for Полимеразная цепная реакция – информация для пациентов

Источник: http://www.probirka.org/biblio/polezno/5189-polimeraznaya-tcepnaya-reaktcia-informatcia-dlya-patcientov.html

Анализ ПЦР диагностики

ПЦР: метод, который слишком хорош

Лабораторные исследования материалов

В наше время существует огромное количество инфекционных заболеваний. Возбудители данных заболеваний настолько быстро приспосабливаются к различным условиям среды, что старые методы диагностики, практически бессильны.

Наряду с традиционными методами исследования (иммунологическими, морфологическими и биохимическими) применяются новейшие технологии, дающие более точные результаты.

Одним из таких методов молекулярной биологии и есть метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) диагностики.

Данный метод имеет множество преимуществ, поскольку он позволяет специфично увеличивать – амплифицировать в 100 раз участок ДНК возбудителя заболевания в образце, который исследуется.

Метод ПЦР диагностики теоретически позволяет обнаружить единственную копию чужеродной ДНК, что говорит об отсутствии чувствительности его предела. Если метод ПЦР диагностики выполнен правильно, в этом случае он не дает ложноположительных результатов.

Следовательно, чтобы выявить возбудителя и определить его природу, необходимо с обычными анализами сделать анализ ПЦР.

Принцип ПЦР

ПЦР диагностика применяется для диагностики ЗППП (заболеваний, которые передаются половым путем). Инфицирование происходит зачастую при незащищенном половом акте. Для некоторых возбудителей возможны и иные пути проникновения в человеческий организм. Непредсказуемость таковых болезней состоит в том, что на ранних стадиях заболевания симптомы, практически отсутствуют.

С помощью традиционных методов диагностики их обнаружить не всегда удается. Учитывая тот факт, что люди затягивают посещение к врачу, и обращаются тогда, когда симптомы налицо, болезнь лечить, в этом случае очень тяжело и длительно.

Поэтому, когда появляется малейшее подозрение на инфекцию, квалифицированный врач посоветует непременно сдать анализ ПЦР, метод диагностики которого поможет в кратчайшие сроки определить наличие возбудителя болезни и начать немедленно лечение.

Как производится анализ метода ПЦР диагностики?

Материалом для исследования методом ПЦР диагностики служат биологические жидкости и выделения организма. Это моча, кровь, мокрота и слюна. Специалист проконсультирует в тщательности подготовки к сдаче анализов данного вида. Рекомендации таковы:

  • для исследования анализа крови методом ПЦР диагностики, анализ берется натощак;
  • метод ПЦР диагностики дает хорошие результаты при изучении соскобов эпителиальных клеток слизистой оболочки уретры и цервикального канала (данный анализ желательно провести по истечении 24 часов после проведенного полового акта).

Метод ПЦР диагностики позволяет выявить наличие скрытых инфекций в организме обоих половых партнеров, поэтому молодым супругам, которые хотят стать родителями советуют его пройти, чтоб не допустить проникновения возбудителей в организм плода. Это дает возможность обнаружить у молодых людей инфекции, и, в случае обнаружения, пролечиться.

Какие вирусы и болезни можно обнаружить с помощью ПЦР диагностики?

При помощи ПЦР диагностики выявляют всевозможные инфекции. Такие как гепатит туберкулез и пр.

Метод ПЦР диагностики дает возможность обнаружить ВИЧ-инфекцию. Заражение ВИЧ происходит при половом контакте и во время контакта с кровью инфицированного больного. Для того чтоб обнаружить ВИЧ используется ИФА (иммуноферментный анализ), который определяет наличие в крови антител на вирус и метод ПЦР диагностики.

Метод ПЦР диагностики проводят, чтоб не только выявить заболевания, которые передаются половым путем, а и обнаружить иные всевозможные инфекции, в том числе и гепатит, и идентификацию его вирусов, например, С и G. Даже в минимальных количествах метод ПЦР обнаруживает вирусы.

Метод ПЦР диагностики дает возможность выявить туберкулез легких и поражения кожного покрова этим возбудителем, а также кишечника, почек и др. органов.

Заболевания органов пищеварения имеют похожие симптомы, для определения микроорганизмов и возбудителей необходимо много времени. Только анализ ПЦР диагностики в кратчайшие сроки поможет поставить правильный диагноз, на основании которого будет назначено эффективное лечение.

Хочется отметить, что при определении молочницы методом ПЦР, существует несколько моментов, которые необходимо знать:

  • При ПЦР диагностике возможен ложноположительный анализ — наличие в материале мочевины.
  • Необходимо учитывать клиническую картину при обнаружении специфической ДНК.

Обнаружение Candida при ПЦР диагностике, всегда будет положительным, но необходимо помнить, что небольшое количество данных грибков – это нормально для здоровой микрофлоры.

Поэтому при молочнице данный метод эффективен для того, чтоб обнаружить инфекции, передающиеся половым путем, поскольку они зачастую сопутствуют молочнице, и тогда, в комплексе исследований будет поставлен точный диагноз, на основании которого лечение будет положительным.

ПЦР диагностика при беременности

Хочется отметить, что при беременности ПЦР диагностику делают, чтоб обнаружить скрытые инфекции, а вот для выявления молочницы этот метод применяют редко.

Наука не стоит на месте, и ПЦР диагностика очень эффективный метод в определении инфекций скрытого типа, которые передаются половым путем. О нем нужно знать, но еще лучше помнить о методах осторожности и культуры половой жизни, чтоб обезопасить себя и близких от ИППП, которые привносят неприятные и опасные моменты в жизнь того, кто их приобрел.

Источник: http://kandidoz.org/analiz-ptsr-diagnostiki/

Как проводят анализ методом ПЦР: описание процедуры

ПЦР: метод, который слишком хорош

Полимеразная цепная реакция известна уже 30 лет. Ее широко используют во многих областях, начиная с археологии и заканчивая генетикой.

Именно метод пцр помогает установить отцовство, но наиболее часто его используют для выявления различных инфекционных болезней в организме человека.

Как проводят анализ методом пцр, и что это такое? На эти вопросы мы постараемся детально ответить.

Анализ ПЦР — что это такое?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии, так и задолго до того, как заболевание может себя проявить.

Метод ПЦР — абсолютно специфичен и выполненный правильно не может дать ложноположительный результат. То есть, если инфекции нет, то анализ никогда не покажет, что она есть. Поэтому сейчас очень часто для утверждения диагноза дополнительно сдают анализ ПЦР, чтобы определить возбудителя и его природу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в 1983 году разработал Кэри Мюллис (США), за что в 1993 году он удостоен Нобелевской премии в области химии.  

В чем преимущество данного метода?

Диагностика этим методом позволяет найти возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. Это самый точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции, различные венерические заболевания.

Отличия ПЦР-диагностики от других методов лабораторного исследования заключаются в следующем:

  • метод нацелен на выявление самого возбудителя;
  • диагностика методом ПЦР отличается универсальностью: для обнаружения возбудителей нескольких;
  • заболеваний достаточно только одного биологического образца больного;
  • метод обладает высокой чувствительностью и не сопровождается другими перекрестными реакциями.

Кроме этого, преимуществом ПЦР-диагностики является то, что для анализа пригоден любой биологический материал пациента: кровь, выделения из половых органов, моча, сперма.

Какие инфекции позволяет выявить мазок на ПЦР?

В организме может присутствовать большое количество возбудителей инфекций, сюда относятся и «скрытые», которые длительное время никак себя не проявляют.

Анализ мазка на ПЦР позволяет выявить такие инфекции:

Исследуемым материалом для ПЦР обычно являются мокрота, слюна, моча, кровь. Перед проведением анализа необходимо тщательно подготовиться к нему, получив предварительную консультацию у врача.

Кровь для ПЦР обычно сдается натощак. Хорошие результаты показывает проведение анализа, когда материал для исследования взят из цервикального канала или уретры. В этом случае лучше всего провести ПЦР-диагностику не позже, чем через сутки после полового акта.

Разновидности ПЦР

ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах. Существуют разные методики проведения анализа:

  1. ПЦР с обратной транскрипцией (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (англ.)) — используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК.
  2. Инвертированная ПЦР (Inverse PCR (англ.)) — используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном.
  3. Вложенная ПЦР (Nested PCR (англ.)) — применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции.
  4. Асимметричная ПЦР (англ. Asymmetric PCR) — проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа.
  5. Количественная ПЦР (Quantitative PCR, Q-PCR (англ.)) или ПЦР в реальном времени — используется для непосредственного наблюдения за измерением количества конкретного ПЦР продукта в каждом цикле реакции.
  6. Ступенчатая ПЦР (Touchdown PCR (англ.)) — с помощью этого подхода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров.
  7. Групп-специфическая ПЦР (англ. group-specific PCR) — ПЦР для родственных последовательностях внутри одного или между разными видами, используя консервативные праймеры к этим последовательностям.

Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания. Например, последовательность праймера может быть такой: …ATH…, где Н — А, Т или С.

Какие биологические материалы исследуются?

Материалом для ПЦР-исследования, в котором можно выявить чужеродную ДНК бактерии или ДНК или РНК вируса могут служить различные биологические среды и жидкости человека:

  1. Моча. Может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин (у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб).
  2. Мокрота. Применяется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный (одноразовый) флакон.
  3. Биологические жидкости. Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям.
  4. Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки.
  5. Биоптаты. Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.
  6. Кровь, плазма, сыворотка. Используются для ПЦР анализа вирусов гепатитов B, C, D, G, герпеса, ЦМВ, ВИЧ, исследования генов человека.

Как подготовиться к сдаче анализа?

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

  1. Моча сдается утром в стерильный контейнер.
  2. Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
  3. Не стоит проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Расшифровка анализа ПРЦ

Процесс интерпретации представленного исследования отличается своей простотой. Результаты пцр анализа можно получить через 1,5-2х суток после сдачи материала. В некоторых случаях результат готов в первый же день, и вот что они могут означать:

  • Отрицательный результат показывает, что в диагностируемом материале отсутствует искомый инфекционный возбудитель.
  • Пцр положительный обозначает, что в организме человека присутствует ДНК или РНК возбудителя.

В некоторых случаях производят количественное определение микроорганизмов. Это особенно актуально при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Так как данные бактерии проявляют свое негативное воздействие лишь при избыточном количестве.

Также количественный анализ ПЦР важен для выбора терапевтической тактики и с целью контроля над лечением таких вирусных инфекций, как ВИЧ и вирусы гепатита.

Насколько точна ПЦР диагностика инфекций?

Метод ПЦР отличается высокой точностью, специфичностью и чувствительностью. Это означает, что данный анализ способен:

  • точно определить наличие или отсутствие инфекции;
  • точно указать, что именно это за инфекция (специфичность);
  • обнаружить инфекцию даже при очень низком содержании ДНК микробов в биологическом материале,
  • который был подвергнут исследованию (чувствительность).

Пцр анализ: цена и сроки

Цена конкретного анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию вы будете проверяться. Примерные цены и сроки:

  1. ИППП: 300-500 руб, сроки — 1 день;
  2. Вирус Эпштейна-Барра, вирус папилломы человека, герпеса, цитомегаловирус: 300-500 руб, сроки — 1 день;
  3. Гепатит A, B, C, D, G: качественный анализ 650 руб, количественный анализ 2000 руб. Сроки — до 5 дней;
  4. Антитела к вирусу гепатита С, суммарные ( Anti-HCV ) — 420 руб;
  5. Антитела к вирусу гепатита C, IgM ( Anti-HCV IgM ) — 420 руб;
  6. Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori): 300-400 руб, сроки — 1 день;
  7. ВИЧ (антитела и антигены) — 380 руб;
  8. РНК ВИЧ, качественно — 3 500 руб;
  9. РНК ВИЧ, количественно — 11 000 руб.

Чтобы сэкономить средства, можно выбирать фиксированный пакет анализов. Такую услугу предоставляет большинство клиник где можно сдать анализ методом ПРЦ (инвитро, онклиник и т.д).

Источник: http://simptomy-lechenie.net/kak-provodyat-analiz-metodom-pcr/

Как и зачем сдавать анализ ПЦР?

ПЦР: метод, который слишком хорош

Анализ ПЦР — что это? Это эффективный метод молекулярной биологии, который применяют в комплексе с уже традиционными иммунологическими, морфологическими и биохимическими исследованиями. Инфекционные заболевания эволюционируют и развиваются, как и само человечество.

С каждым годом их становится все больше, а диагностировать их все труднее. Факторы, которые провоцируют появление болезней и влияют на их развитие, тоже постепенно приспосабливаются к окружающим внешним условиям, меняясь вместе с ними.

Это послужило причиной тому, что в медицине стали появляться новые методы и технологии, которые помогают получить более точные результаты в диагностике того или иного заболевания.

Подробнее об анализе ПЦР

Такая методика лабораторной диагностики инфекционных заболеваний основывается на том, чтобы обнаружить возбудитель инфекции, которую подозревает врач в материале исследования. Полимеразная цепная реакция будет их идентифицировать, выявляя соответствующий генетический материал (РНК либо ДНК) в пробах, которые взяты у пациента.

ПЦР была изобретена американским ученым Кэри Мюллисом в 1983 году.

Большинство инфекций, если выявить их на ранних стадиях развития, хорошо поддается лечению. Именно поэтому метод ПЦР столь действенный, ведь он способен выявить даже вирусы или бактерии, чьи клетки единичны в материале.

Более того, такая диагностика определяет вирус, устанавливает природу его появления, силу, с которой он воздействует на организм, даже количество микробов в организме пациента.

Всю информацию, полученную методом полимеразной цепной реакции, врач сможет применить для того, чтобы выбрать подходящие лекарственные препараты и назначить соответствующее лечение.

Исследование методом ПЦР

По самому принципу работы все происходит достаточно просто. Взятый у пациента биологический материал помещают в специальный реактор. Потом туда же добавляются такие специфические ферменты, которые смогут связаться с ДНК существующего в материале микроба и совершить синтез ее копии.

В основе копирования лежит принцип цепной реакции. То есть на совершение всего процесса потребуется несколько этапов. Сначала 1 молекула ДНК образует 2 новые молекулы, потом из них получится уже 4 новых, и так до сотен и тысяч копий. После этого будет проведен анализ и его расшифровка.

Фрагменты ДНК микроба могут содержаться в различном биологическом материале:

  • в биологических жидкостях (слюне, суставной, околоплодной, плевральной, спинномозговой жидкости, соке простаты);
  • в крови и ее сыворотке, в плазме;
  • в соскобе эпителиальных клеток (соскоб из цервикального канала, из уретры — как для женщин, так и для мужчин);
  • в моче (на анализ потребуется утренняя моча, а именно ее первая порция);
  • в мокроте;
  • в слизи и других биологических выделениях;
  • в биопатах желудка и двенадцатиперстной кишки.

Какие заболевания могут быть выявлены методом ПЦР?

Врачи считают этот вид диагностики одним из наиболее точных. Данное исследование позволяет обнаружить практически все вирусные заболевания, которые на сегодняшний день известны медицине.

Очень важным аспектом является и то, что среди них есть такие инфекции, которые живут в человеческом организме долгие годы, при этом никак не проявляя себя. Они просто растут в ожидании, когда им будет наиболее комфортно проявиться (снижение иммунитета, истощение организма и прочее).

Выявление таких инфекций скрытого типа особенно актуально в урологических и гинекологических областях.

Вот некоторые заболевания, по которым зачастую проводят анализ методом полимеразной цепной реакции:

  • гепатиты В и С;
  • многие болезни, которые передаются половым путем (диагностика хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, кандидоза половых органов, бактериального вагиноза, трихомониаза, инфекционного мононуклеоза, папилломавирусной инфекции (ВПЧ), СПИДа и пр.);
  • герпесная инфекция (включая и половой герпес);
  • туберкулез и хеликобактериоз.

Метод ПЦР дает хорошие результаты, потому что большинство из этих заболеваний характерно тем, что их симптомы (особенно на ранней стадии) не особо приметны. Зато последствия, которые они оказывают на организм, очень негативны и зачастую весьма опасны для здоровья и даже жизни.

К примеру, болезни, передающиеся половым путем, могут у женщин существенно увеличить возможность возникновения рака шейки матки, негативно повлиять на течение беременности или стать причиной бесплодия. К тому же именно от здоровья матери зависит и здоровье ее будущего малыша.

Поэтому очень важно при малейших подозрениях на скрытые инфекции вовремя сдать кровь на диагностику, чтобы не допустить заражения плода через проникновение возбудителей болезни.

Для мужчин последствия не менее негативные: снижение подвижности и жизнеспособности сперматозоидов, развитие мужского бесплодия и простатита, поражение мочеиспускательного канала и прочее.

Такой анализ очень актуален и для своевременного выявления вирусного гепатита, туберкулеза, различных кишечных инфекций.

Когда требуется немедленное лечение, очень важно понимать, какой именно возбудитель поразил организм и с чем предстоит бороться.

Кровь или любой другой биологический материал пациента поможет провести полную и правильную диагностику и назначить лечение, которое поможет скорейшему восстановлению функций организма и будет способствовать выздоровлению.

Герпес тоже чрезвычайно устойчив и опасен. Из неактивного режима он легко может перейти в прогрессирующий, поражая центральную нервную систему, влияя на возникновение и развитие таких страшных болезней, как менингит и энцефалит.

Расшифровка анализа

После проведения исследования вы можете получить либо положительный, либо отрицательный результат.

Именно положительные результаты будут указывать на то, что та или иная инфекция присутствует в вашем организме.

Отрицательный результат расшифровывается так, что в организме пациента предполагаемая инфекция отсутствует. То есть в биологическом материале, который был сдан на исследование, ничего не обнаружили.

Любые показатели должен расшифровать и озвучить вам врач. Не расстраивайтесь и не пугайтесь плохих результатов, ведь реакция выявила заболевание, а это значит, что после дополнительных обследований доктор сможет назначить полноценное лечение. Главное — не заниматься самолечением и не затягивать процесс.

Подготовка к анализу: что нужно знать?

Для обнаружения разных заболеваний потребуются разные биологические материалы. До того как сделать ПЦР, обязательно проконсультируйтесь с соответствующим специалистом и тщательно подготовьтесь к предстоящей процедуре.

Для этого понадобится строго выполнять все рекомендации и указания вашего доктора. Не забудьте, что кровь, как правило, берут натощак.

Для сдачи мазка из влагалища или уретры нужно 1-2 суток воздержаться от половых контактов, всю необходимую гигиену половых органов проводить с вечера, а утром только ополоснуть теплой водой. Также важно прекратить приблизительно за неделю прием лекарственных препаратов, если они не оговорены с врачом.

И в течение 2-3 часов до того, как сдать анализ, не мочиться. Для женщин стоит учесть то, что оптимальное время для проведения исследования — это несколько дней перед или сразу после менструации.

Метод ПЦР: основные достоинства и недостатки

У данного вида диагностики очень много преимуществ.

Во-первых, любые возбудители инфекционных заболеваний определяются по прямому на них указанию, в отличие от других традиционных лабораторных исследований.

Во-вторых, этот анализ просто универсальный, ведь для его проведения доступны почти любые биологические материалы, которые зачастую не приемлет любой другой метод исследования.

Очень важным является тот момент, что когда проводится эта диагностика, то в исследуемом материале происходит выделение фрагмента ДНК, который будет присущ только какому-то конкретному возбудителю, то есть сугубо определенному вирусу или бактерии. Это говорит о том, насколько специфичной является данная реакция.

Еще одним аргументом в пользу этой диагностики будет высокая скорость ее выполнения. Если для любых культуральных исследований потребуются не дни, а даже недели, необходимые для выделения и выращивания возбудителя на культуре клеток, то данный метод позволит получить результаты в течение 4-5 часов.

ПЦР дает возможность обнаружить не только ту инфекцию, которая уже находится на пике заболевания, но также и хронические болезни, любые единичные вирусы или бактерии.

Такая диагностика возможна из-за очень высокой чувствительности метода.

Сюда следует отнести и тот факт, что инфекция будет обнаружена даже в том случае, если в биологическом материале, который был сдан на анализ, будет присутствовать всего лишь одна клетка того или иного вируса либо бактерии.

Реакция на ложноотрицательные результаты встречается очень редко.

Правда, метод имеет и свои недостатки. Одним из них является возможность получения ложноположительного результата.

Это зачастую происходит из-за того, что инфекция уже убита, но ее клетки эпителия еще не обновились, поэтому ее мертвые остатки реакция все равно увидит и будет клонировать.

Поэтому стоит либо дождаться полного выведения из организма мертвых клеток инфекции (от месяца до двух после проведенного лечения), либо на раннем сроке использовать другие методы: посев или культуральный. Позже можно будет провести контроль и с помощью ПЦР.

Еще одной слабостью анализа считается изменчивость всех микроорганизмов. Это значит, что какие-то генотипы возбудителей, которые уже мутировались в организме, будут неуловимы для тест-системы и никакая реакция не произойдет. Для этого производятся различные разработки, чтобы усовершенствовать данный метод.

Источник: http://101analiz.ru/diagnostika-zabolevanij/analiz-pcr.html

Преимущества и недостатки метода пцр

ПЦР: метод, который слишком хорош

(какметода диагностики инфекционныхзаболеваний):

1. Прямое определение наличия возбудителей

Многиетрадиционные методы диагностики,например иммуноферментный анализ,выявляют белки-маркеры, являющиесяпродуктами жизнедеятельности инфекционныхагентов, что дает лишь опосредованноесвидетельство наличия инфекции. Выявлениеспецифического участка ДНК возбудителяметодом ПЦР дает прямое указание наприсутствие возбудителя инфекции.

2. Высокая специфичность

Высокаяспецифичность метода ПЦР обусловленатем, что в исследуемом материалевыявляется уникальный, характерныйтолько для данного возбудителя фрагментДНК. Специфичность задается нуклеотиднойпоследовательностью праймеров, чтоисключает возможность получения ложныхрезультатов, в отличие от методаиммуноферментного анализа, где нередкиошибки в связи с перекрестно-реагирующимиантигенами.

3. Высокая чувствительность

МетодПЦР позволяет выявлять даже единичныеклетки бактерий или вирусов.

Теоретическидля осуществления реакции достаточновсего одной копии искомой ДНК (РНК)-последовательности в исследуемомматериале, что позволяет использоватьее даже в тех случаях, когда серологическиеи бактериологические исследования недают положительного результата вследствиекрайне низкого микробного титра (напримерпри контроле инфекционной безопасностидонорской крови и органов, диагностикехронических и латентных инфекций).

4. Универсальность процедуры выявления различных возбудителей

Материаломдля исследования методом ПЦР служитДНК возбудителя. Метод основан навыявлении фрагмента ДНК или РНК,являющегося специфичным для конкретногоорганизма.

Сходство химического состававсех нуклеиновых кислот позволяетприменять унифицированные методыпрове­дения лабораторных исследований.Это дает возможность диагностироватьнесколько возбудителей из одной биопробы.

В качестве исследуемого материала могутиспользоваться различные биологическиевыделения (слизь, моча, мокрота), соскобыэпителиальных клеток, кровь, сыворотка.

5. Высокая скорость получения результата анализа

Дляпроведения ПЦР-анализа не требуетсявыделение и выращивание культурывозбудителя, что занимает большоеколичество времени. Это особенно заметнопри исследовании медленнорастущихмикроорганизмов. Однако даже в случаебыстрорастущих культур оперативностьПЦР может быть полезной.

Например,выделение, идентификация и определениелекарственной устойчивости у штаммовметициллинрезистентногозолотистого стафилококка (MRSA)с помощью традиционных микробиологическихметодов требуют не менее 3-5 дней, в товремя как ПЦР-анализ позволяет выявитьMRSAменее чем за сутки.

6. Возможность диагностики не только острых, но и вялотекущих, скрытых инфекций

Особенноэффективен метод ПЦР для диагностикитруднокультивируемых, некультивируемыхи персистирующих форм микроорганизмов,с которыми часто приходится сталкиватьсяпри латентных и хронических инфекциях,поскольку этот метод позволяет избежатьсложностей, связанных с выращиваниемтаких микроорганизмов в лабораторныхусловиях. Применение ПЦР-диагностикитакже очень эффективно в отношениивозбудителей с высокой антигеннойизменчивостью и внутриклеточныхпаразитов. Методом ПЦР возможно выявлениевозбудителей не только в клиническомматериале, полученном от больного, нои в материале, получаемом из объектоввнешней среды (вода, почва и т.д.).

Однакоследует отметить, что метод ПЦР лишьдополняет спектр традиционных методов,используемых в микробиологическойдиагностике. Наиболее рационально иэффективно применение ПЦР для обнаружениямикроорганизмов, трудно-выявляемых влабораторных условиях, атипичных формбактерий. К ним также относятсявнутриклеточные паразиты и микроорганизмы,способные длительно существовать ворганизме хозяина.

Наиболееэффективно и обоснованно использованиеметода в урогинекологической практике– для выявления хламидиоза, уреаплазмоза,гонореи, герпеса, гарднереллеза,микоплазменной инфекции, ВПЧ-вирусапапилломы человека; в пульмонологии –для дифференциальной диагностикивирусных и бактериальных пневмоний,туберкулеза; в гастроэнтерологии – длявыявления геликобактериоза; в клиникеинфекционных заболеваний – в качествеэкспресс-метода диагностики сальмонеллеза,дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G;в гематологии – для выявленияцитомегаловирусной инфекции, онковирусов.Высокоспецифичная, чувствительная ибыстрая диагностика многих тяжелыхзаболеваний способствует не только ихэффективному лечению, но и предотвращениюраспространения.

Вто же время экстремальная чувствительностьПЦР требует новых подходов к клиническойинтерпретации результатов, получаемыхв лаборатории.

В частности, выявлениев клинических образцах сапрофитных иусловно-патогенных микроорганизмовможет не означать наличия патологическогопроцесса и поэтому не может бытьавтоматически интерпретировано какдиагноз, особенно на фоне благополучнойклинической картины у пациента.

По этойже причине следует с осторожностьюиспользовать ПЦР для анализа образцовс характерным полимикробным сообществом(кал и материал, полученный из верхнихдыхательных путей и гениталий).

Экстремальнаячувствительность реакции ферментативнойамплификации ДНК является одновременноахиллесовой пятой технологии ПЦР.

Этотпарадокс известен также как проблемачувствительности ПЦР к загрязнению(контаминированию) постороннимимолекулами ДНК, которые могут служитьмишенью для используемого наборапраймеров.

Даже единичные молекулызагрязняющей ДНК могут быть многократнокопированы в процессе ПЦР, приводя кобразованию целевого ДНК-продукта, аследовательно, к ложноположительномурезультату.

Существуютразные источники ПЦР-загрязнения.Наиболее частым является контаминированиереакционной смеси ДНК-продуктамипредыдущих реакций.

В результате ПЦР вкаждой реакционной пробирке можетобразовываться более миллиарда копийисходной последовательности ДНК, каждаяиз которых, всвоюочередь, является потенциальной мишеньюдля последующей амплификации.

В процессеанализа синтезированные фрагменты ДНКмогут легко распространяться в лабораториив виде аэрозоля (при открывании реакционныхпробирок), через руки исследователей илабораторные принадлежности, загрязняяреактивы и материалы, используемые вПЦР, и приводя к ложноположительномурезультату анализа образцов, в которыхисходно отсутствовала ДНК искомоговозбудителя. В случае высокой концентрациимикробной ДНК в исследуемом клиническомматериале ПЦР-загрязнение можетпроисходить при переносе даже небольшогоколичества ДНК из одного образца вдругой, например, через поверхностьперчаток при открывании пробирок собразцами или через приспособления,используемые для механическойгомогенизации тканей.

Прииспользовании ПЦР с универсальнымипраймерами (см. выше) источникомзагрязняющей ДНК могут служитькоммерческие препараты ДНК-полимерази других реактивов, применяемых в ПЦР.

В связи с опасностью полученияложноположительных результатов влабораториях, постоянно использующихПЦР в диагностических целях, необходимысоблюдение строгих требований испециальные подходы, направленные наснижение риска ПЦР-загрязнения.

Однимиз наиболее существенных требований,предъявляемых к диагностическимПЦР-лабораториям, является необ­ходимостьразделения лаборатории на«пред-ПЦР-помещения», где осуществляютсяобработка образцов и приготовлениереакционных смесей, и «после-ПЦР-поме­щения»,где анализируются продукты реакции.

Обязательными являются также раздельноехранение реактивов и материалов,используемых на разных этапах ПЦР,максимальное использование одноразовыхпластиковых материалов на этапе,предшествующем амплификации, и регулярнаяобработка помещений ультрафиолетовым(УФ) излучением, повреждающим загрязняющиепоследовательности ДНК.

Дополнительныемеры, обеспечивающие защиту ПЦР отзагрязнения, могут включать использованиеламинарных боксов для работы с образцамии приготовления ПЦР-смесей, специальныебиохимические (урацилгликозилаза) ифизико-химические (УФ излучение +изопсорален) методы инактивацииПЦР-продуктов. Особенно важно для оценкидостоверности данных ПЦР-анализа иотсутствия ложноположительных результатоврегулярное исследование отрицательныхконтролей (не содержащих ДНК-мишень)параллельно с клиническими образцами.

Помимоопасности получения ложноположительныхрезультатов существует и обратнаяпроблема, связанная со снижениемчувствительности ПЦР, следствиемкоторого являются ложноотрицательныерезультаты.

Напрактике вопрос о соотношении теоретической(то есть максимально возможной) и реальнойчувствительности ПЦР не всегда решаетсяоднозначно.

Чувствительность ПЦР можетбыть снижена вследствие многих причин,наиболее важной из которых являетсяингибированиереакциикомпонентами биологических образцов.

ИнгибиторыПЦР могут присутствовать в образцахкрови (гемоглобин), мокроты, мочи,биопсийном материале. Различные вещества,например часто используемые антикоагулянты(особенно гепарин) или компонентыкровяных питательных сред, могут такжеподавлять реакцию амплификации ДНК.

Ингибирование ПЦР обычно можно выявитьпутем искусственного добавленияДНК-мишени к исследуемому образцу и еепоследующей амплификации.

Отрицательныйрезультат, полученный с заведомоположительным контролем, может говоритьо наличии ингибиторов, для устранениякоторых необходимо использоватьразведение образца или специальныеметоды подготовки проб.

Серьезнуюпроблему представляет также выборконкретных методов подготовки клиническихобразцов к исследованию с помощью ПЦР.В настоящее время не существуетуниверсальных подходов к выделению ДНКразных видов микроорганизмов из различныхисточников.

Быстрые методы подготовкипроб, предусматривающие возможностьавтоматизации, иногда не позволяютдостичь требуемого уровня чувствительности.

С другой стороны, многоэтапные методики,позволяющие очистить и сконцентрироватьмикробную ДНК для ПЦР-анализа, оказываютсятрудоемкими и могут увеличивать рискконтаминирования образцов.

Наконец,ПЦР является дорогостоящей. Для еереализации необходимо комплексноеоснащение лаборатории, включая не толькотермоциклер и устройство дляДНК-электрофореза, но и отдельныецентрифуги, холодильники, дозаторы идругое оборудование.

Затраты на ПЦРвключают высокую стоимость реактивови расходуемых материалов. Поэтому тольков случае выявления и исследованиятруднокультивируемых возбудителей ПЦРможет быть сопоставима по стоимости страдиционными микробиологическимиметодами.

Источник: https://StudFiles.net/preview/5778799/page:5/

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.